在醫(yī)學(xué)院校不管是教學(xué)還是科研工作潔凈室是必備的實驗條件之一。其中實驗教師以及研究生更是使用潔凈室的主力軍,， 但在教學(xué)過程中發(fā)現(xiàn),， 很多教師和研究生對如何正確使用潔凈室還存在很多誤區(qū)， 本文將從潔凈室的概念,、要求,、監(jiān)測方法、使用注意點幾個方面綜合闡述如何正確使用潔凈室,。

1 什么是潔凈室

首先高校師生對潔凈室的概念存在誤區(qū),， 大部分師生都稱之為無菌室， 事實上絕對無菌的空間是很難獲得的,， 更專業(yè)的稱呼如題名應(yīng)該叫 “潔凈室”[1],。那什么樣的空間可以稱之為“潔凈室”呢?以下從概念,、狀態(tài)、氣流形式,、分級幾個方面來闡述,。同時引申一個問題， 潔凈到什么樣的程度才可以符合實驗要求?

概念：對塵粒及微生物污染規(guī)定需進行環(huán)境控制的房間和區(qū)域,， 其建筑結(jié)構(gòu),、裝備及其使用均具有減少對該區(qū)域污染的介入,、產(chǎn)生和滯留的功能[2],。其他相關(guān)參數(shù)如溫度、濕度,、壓力也有必要控制,。

狀態(tài)：靜態(tài) (at-rest)指凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)已安裝完畢且功能完備的情況下,， 潔凈室內(nèi)工作人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過20 min自凈后的狀態(tài)。動態(tài)(operational)指潔凈室處于正常工作狀態(tài),， 設(shè)備正常運行,， 并且有指定的人員按照規(guī)范操作。對于高校師生來講更應(yīng)該關(guān)注動態(tài)的監(jiān)測結(jié)果,。

氣流形式：單向流(unidirectional airflow)：沿單一方向呈平行流線并且與氣流方向垂直的斷面上風(fēng)速均勻的氣流,。與水平面垂直的叫垂直單向流(vertical unidirectional airflow)， 與水平面平行的叫水平單向流(horizontal unidirectional airflow),。非單向流(non-unidirectional airflow)：具有多個通路循環(huán)特性或氣流方向不平行的氣流,。高校實驗用潔凈室由于面積比較小， 一般都是垂直單向流設(shè)計的,。

2 潔凈室的要求

潔凈室等級：潔凈度 (cleanliness)是指潔凈環(huán)境內(nèi)單位體積空氣中含大于或等于某一粒徑懸浮粒子的統(tǒng)計數(shù)量來區(qū)分的潔凈程度[3],。根據(jù)《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》(2010)規(guī)定， 分級見表1,。

醫(yī)學(xué)院校的潔凈室大都進行生物實驗,， 所以還應(yīng)當(dāng)關(guān)注環(huán)境的微生物狀況。要求見表2,。

根據(jù)《中國藥典》(2010)規(guī)定,， 無菌檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度 10000 級， 局部潔凈度 100 級的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進行,， 對于醫(yī)學(xué)院校的生物實驗,， 如無特殊規(guī)定也都按這個要求， 也就是通常所見10000級實驗室套100級超凈臺的設(shè)計[4],。以下著重闡述高校使用率很高的10000級實驗室套100級超凈臺的潔凈室的監(jiān)測和使用,。判定10000級潔凈室及100級超凈工作臺是否有效運行應(yīng)該分別按照表1、表2的C級和A級執(zhí)行,。

3 潔凈室的監(jiān)測

潔凈室需要控管的項目包括溫度,、濕度,、靜壓差、風(fēng)速,、微粒,、浮游菌、沉降菌,， 當(dāng)然在設(shè)計之初還有噪音,、光照度、 安全,、節(jié)能等方面的考慮,。對于使用者來說使用過程中學(xué)會日常監(jiān)測非常重要， 這是保證教學(xué)科研工作的前提之一,， 也有利于在出現(xiàn)異常數(shù)據(jù)時排查原因,。

溫度、濕度,、靜壓差,、風(fēng)速是預(yù)測試指標， 只有這些指標都在規(guī)定范圍內(nèi),， 后續(xù)3個主測試指標的監(jiān)測才有意義,。溫濕度要求使用者可以自己把握， 如無特殊要求時,， 溫度在18～26℃,， 相對濕度在45%～65%為宜。潔凈室與非潔凈室之間的靜壓差應(yīng)>10 Pa;相鄰不同潔凈級別的潔凈室之間的壓差應(yīng)>0.5 Pa;潔凈區(qū)與室外壓差應(yīng)>12 Pa,。單向流凈室實測室內(nèi)平均風(fēng)速應(yīng)大于設(shè)計風(fēng)速,， 但不應(yīng)超過15%。以上測試可以通過溫濕度儀,、微壓計,、風(fēng)速儀來完成。

懸浮粒子測試可以通過微粒計數(shù)儀來完成,。監(jiān)測時首先用面積開根號的方法確定最少采樣點數(shù)目， 學(xué)校生物實驗室都比較小,， 一般每間3～4個點就夠了,， 采樣時需注意采樣點在室內(nèi)均勻分布并盡量避開回風(fēng)口， 采樣管口應(yīng)正對氣流方向,， 高度約離地80 cm,， 測試人員應(yīng)在采樣口的下風(fēng)側(cè)， 并盡量減少活動,。為保證儀器下次能正常使用,， 采樣完畢一定啟動儀器的自凈程序,。

浮游菌、沉降菌的采樣方法及注意事項同懸浮粒子,， 分別通過浮游菌采樣儀及帶有微生物培養(yǎng)基的平皿來完成,。培養(yǎng)皿在用于檢測時， 為避免培養(yǎng)皿運輸或搬運過程造成的影響,， 宜同時進行陰性對照試驗,， 每次或每個區(qū)域取1個對照皿， 與采樣皿同法操作但不需暴露采樣,， 然后與采樣后的培養(yǎng)皿一起放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),， 結(jié)果應(yīng)無菌落生長。

至于以上指標的監(jiān)測頻率除沉降菌外使用者可以自己把握,， 潔凈室啟用之初應(yīng)每周監(jiān)測,， 如果數(shù)據(jù)穩(wěn)定， 適當(dāng)延長周期,， 但建議至少每3個月監(jiān)測1次,。每次實驗時超凈臺及潔凈室內(nèi)都應(yīng)當(dāng)放置沉降菌平板， 相當(dāng)于一個實驗環(huán)境的陰性對照,， 而對于微生物實驗,， 尤其是細菌總數(shù)， 只有在監(jiān)測數(shù)據(jù)符合對應(yīng)等級的潔凈室要求時數(shù)據(jù)才有效,。

4 使用潔凈室的注意事項

嚴格控制進出潔凈室的人員,， 盡量門徑管理， 只有有實驗需求的師生方可進入,， 謝絕一切不必要的參觀,。進出實驗室嚴格按照設(shè)計路徑。

使用潔凈室之前先打開凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)和紫外燈,， 至少運行30 min;實驗相關(guān)物品經(jīng)傳遞窗紫外燈照射30 min后進入實驗室,， 物品準備齊全， 避免實驗過程中反復(fù)進出實驗室增加污染幾率;進入潔凈室必須換鞋,、更衣,、帶好口罩帽子， 帽子必須將頭發(fā)全部遮住,， 然后風(fēng)淋進入緩沖區(qū),， 最后進入實驗室。值得一提的是,， 使用者如果患有呼吸道疾病或皮膚疾病盡量不要進入潔凈室,， 以免影響實驗結(jié)果。

實驗過程中嚴格無菌操作， 避免喧嘩,、吵鬧,， 更不能飲水， 吃東西,， 與實驗不相關(guān)的東西不得帶入實驗室,。

實驗結(jié)束清潔消毒， 紫外燈消毒30 mim,。師生們需要注意的是紫外燈使用是有壽命的,， 做好紫外燈使用記錄， 如果有紫外燈強度計日常監(jiān)測那就更好了,。

5 討論

不管是科研還是教學(xué),， 實驗數(shù)據(jù)的真實性一直是我們不懈追求的目標。在潔凈室完成的生物實驗一旦污染自然前功盡棄,， 對于微生物實驗來說,， 還可能造成嚴重的結(jié)果偏離， 影響教學(xué)科研質(zhì)量,， 更讓很多老師及在校研究生的辛勤勞動付之東流,。

工作中發(fā)現(xiàn)高校師生使用潔凈室時主要存在的不足是：使用不規(guī)范， 維護不重視,， 日常不監(jiān)測,。雖然大部分師生在實驗中很注意無菌操作， 但由于忽視了實驗操作所在的大環(huán)境,， 實驗污染的情況還是時有發(fā)生,。所以醫(yī)學(xué)院校的師生還是很有必要進行潔凈室概念、要求,、監(jiān)測方法,、使用注意事項的宣傳， 建議建立使用潔凈室的標準作業(yè)指導(dǎo)書,， 潔凈室專人管理,， 配備溫濕度儀、微壓計,、風(fēng)速儀,、微粒計數(shù)儀、浮游菌采樣儀,、紫外燈強度計,、微生物培養(yǎng)箱等必要的監(jiān)測儀器， 數(shù)據(jù)有問題時及時報修,， 必要時暫停使用， 保證師生在一個安全有效的實驗環(huán)境下開展教學(xué)科研工作,。